貨源介紹

---

　　PT-K75豬鼻甲黏膜成纖維細胞

　　規格：1*10 6

　　細胞特性

　　1）來源：豬鼻

　　2）形態：成纖維細胞樣，貼壁生長

　　3）含量：>1x106個/mL

　　4）汙染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　運輸和保存

　　可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式

　　（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；

　　（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

　　（3）收到細胞後請拍照，3天內如果發現汙染，請及時拍照與我們聯係。

　　細胞用途：僅供科研使用。

　　細胞接收後的處理：

　　1）收到細胞後，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們。

　　2）在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

　　3）觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h。

　　4）貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

　　5）懸浮細胞：T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基）。

　　6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基來培養細胞。收到細胞後第一次傳代建議1：2傳代。

　　細胞培養步驟

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備DMEM培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，置於37℃培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養液後吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以後傳代比例可根據客戶需要自己決定。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

　　注意事項：

　　1.收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與我們聯係。

　　2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為我方進行銷售依據。

　　3.由於細胞狀態受環境、操作和運輸等多方麵因素影響，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內的細胞狀態，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大於7天。

　　4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟棄。

　　下麵T25瓶為類；

　　1，細胞凍存時，棄去培養基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

　　2，4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低於1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

　　3，將凍存管置於程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。