細胞庫RBL-2H3大鼠嗜堿性細胞白血病細胞是1978年國立牙科研究所的免疫學實驗室從(cong) Wistar大鼠保持腫瘤狀態的嗜堿性細胞中分離和克隆出來的嗜堿性白血病細胞株。這些細胞具有高親(qin) 和力的IgE受體(ti) 。通過集聚這些受體(ti) 或與(yu) 鈣離子載體(ti) 協同作用可以激活它們(men) 分泌組胺及其他遞質。這株細胞廣泛地用於(yu) 研究肥大細胞FcERI和分泌的生化途徑。RBL-2H3細胞是研究FcERI結構的模型。它們(men) 廣泛地用於(yu) 研究細胞分泌的不同方麵，包括細胞內(nei) 鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS都支持細胞的生長，但在某些批號中FcERI集聚後脫粒化得更好。另一株大鼠嗜堿性細胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會(hui) 脫粒化。

　　細胞特性

　　1) 來源：大鼠外周血

　　2) 形態：成纖維細胞，貼壁生長

　　3) 含量：>1x106  細胞數

　　4) 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)  用途：僅(jin) 供科研使用。

　　運輸和保存

　　幹冰運輸及複蘇好存活細胞

　　(1)1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

　　(2)T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

　　細胞接收後的處理

　　1)收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

　　2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照(10×，20×)各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

　　3)貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基(若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中),加入新配製的完全培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

　　4)備注：運輸用的培養(yang) 基(灌液培養(yang) 基)不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。

　　一.培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

　　1) 準備MEM 培養(yang) 基;優(you) 質胎牛血清15%;雙抗，1%。

　　2) 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

　　3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二.細胞處理：

　　1) 凍存細胞的複蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶(或皿)中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2) 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

　　對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法：

　　1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL)，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾(難消化的細胞可以適當延長消化時間)，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

　　3.輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3)細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

　　下麵T25瓶為(wei) 例;

　　1. 細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml.

　　2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　3. 將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。

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