智立中特(武漢)生物科技有限公司主要致力於(yu) 質粒微生物資源的保護、共享和持續利用，圍繞我國生命科學研究、生物技術創新和產(chan) 業(ye) 發展等重大需求，探索、發現、收集國內(nei) 外的微生物資源，妥善長期保存管理;在保證生物安全和保護知識產(chan) 權的前提下，為(wei) 工農(nong) 業(ye) 生產(chan) 、衛生健康、環境保護、科研教育提供質粒載體(ti) 物物種資源、基因資源、信息資源和專(zhuan) 業(ye) 技術服務。旗下質粒載體(ti) 網是一款提供質粒載體(ti) 展示及定製的專(zhuan) 業(ye) 型網站，由智立中特(武漢)生物科技有限公司聯合多家企業(ye) 公司科研院校共同打造!主要展示了各種基因類型下的質粒載體(ti) !

　　我們(men) 的工作主要包括：廣泛分離、收集、保藏、交換和供應各類微生物質粒菌種;保存用於(yu) 專(zhuan) 利程序的各種可培養(yang) 生物材料;質粒載體(ti) 類保藏技術研究;微生物分離、培養(yang) 技術研究;微生物鑒定和複核技術研究;保藏菌種的資料情報收集和提供及編輯微生物菌種目錄。

　　目前保存各類載體(ti) 資源超過20000餘(yu) 種 ，質粒微生物約5000株，另外我們(men) 還代理國外微生物菌種資源，如addgene，安捷倫(lun) ，thermo，atcc等。

　　ASMC小鼠氣道平滑肌細胞細胞購買(mai) zlzt生物

　　細胞特性

　　1) 來源：小鼠，氣道

　　2) 形態：成纖維樣，貼壁生長

　　3) 含量：>1x106  細胞數

　　4) 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅(jin) 供科研使用。

　　運輸和保存

　　幹冰運輸及複蘇好存活細胞

　　(1)1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

　　(2)T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

　　細胞接收後的處理

　　1)收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

　　2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照(10×，20×)各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

　　3)貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基(若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中),加入新配製的完全培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

　　4)備注：運輸用的培養(yang) 基(灌液培養(yang) 基)不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。

　　細胞培養(yang) 步驟

　　一.培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備

　　1) 準備1640)培養(yang) 基;優(you) 質胎牛血清，10%;雙抗，1%。

　　2) 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

　　3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二、細胞處理：

　　1) 凍存細胞的複蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶(或皿)中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2) 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

　　對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法：

　　1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL)，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾(難消化的細胞可以適當延長消化時間)，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

　　3.輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3)細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

　　下麵T25瓶為(wei) 例;

　　1. 細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml.

　　2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　3. 將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。