貨源介紹

---

　　一、NCI-H345人小細胞肺癌細胞介紹

　　產品類別：人源細胞係

　　生長特性：貼壁生長

　　培養體係：1640+10%FBS+1%P/S

　　傳代方法：1：2傳代

　　細胞形態：上皮細胞樣

　　凍存條件：無血清細胞凍存液

　　二、細胞收到後處理：

　　細胞在培養瓶中培養至良好狀態後灌滿完全培養液並封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室後，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒後放到超淨台內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰鬆）

　　細胞接收後的處理

　　1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售後時收到時細胞狀態的依據。

　　3）懸浮細胞：T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基）。

　　4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基來培養細胞。收到細胞後第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。

　　三．細胞處理：

　　1）凍存細胞的複蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對於懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

　　懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液後重懸混勻後將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，後續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞後建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。