貨源介紹

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　　一、細胞介紹

　　細胞名稱EBTr(NBL-4)（牛胚氣管細胞）

　　種屬牛

　　年齡（性別）雄；胚胎

　　組織來源胚胎，氣管

　　生長特性貼壁

　　細胞形態成纖維細胞樣

　　背景描述EBTr(NBL-4)細胞牛痢疾病毒(BVDV)陰性。

　　生長培養基MEM＋10%FBS＋1%P/S

　　培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　二、運輸和保存

　　幹冰運輸及複蘇好存活細胞

　　（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與我們聯係。

　　（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

　　細胞接收後的處理：

　　1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售後時收到時細胞狀態的依據。

　　3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置於37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心後用完全培養基重懸後打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心後回收。

　　4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的完全培養基來培養細胞。收到細胞後第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。

　　三、細胞處理：

　　1）凍存細胞的複蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

　　該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

　　1.收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由於細胞貼壁不牢PBS潤洗後細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置於37℃培養箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

　　3.將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液後重懸混勻後將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，後續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞後建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。