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細胞名稱H9c2(2-1)(大鼠心肌細胞)

種屬大鼠

年齡(性別)胚胎

組織來源心髒，心肌層

生長特性貼壁

細胞形態成肌細胞樣

背景描述H9c2(2-1)細胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從(cong) BD1X大鼠胚胎心髒組織的克隆細胞株亞(ya) 克隆得到的細胞株;H9c2(2-1)細胞表現出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，並對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養(yang) 基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合發生得很快。

生長培養(yang) 基DMEM高糖+10% FBS+1% P/S

培養(yang) 條件氣相：空氣，95%;CO2.5%溫度：37℃

細胞接收後的處理

1)收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照(10×，20×)各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

3)貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基(若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中),加入新配製的完全培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注：運輸用的培養(yang) 基(灌液培養(yang) 基)不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完全培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。

細胞處理：

1) 凍存細胞的複蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶(或皿)中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL)，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾(難消化的細胞可以適當延長消化時間)，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

3.輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的完全培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。