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細胞名稱：GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結轉移癌細胞)

種屬：人

培養(yang) 條件氣相：空氣，95%;CO2.5%溫度：37℃

GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結轉移癌細胞)保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為(wei) 兩(liang) 種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是複蘇後寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用幹冰運輸;後者是將細胞複蘇至T-25培養(yang) 瓶中，采用常溫運輸。兩(liang) 者各有優(you) 缺點，第一種方式的優(you) 點是可以長途運輸，因為(wei) 細胞在幹冰中相對穩定，一般可以保證數周之內(nei) 不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞複蘇是很複雜的過程，如果細胞複蘇後狀態不佳，則很難界定是來源的問題還是複蘇操作的問題;而第二種方式的優(you) 點是細胞收到後可以直接通過觀察來大體(ti) 了解細胞狀態，並且對運輸的要求相對較低，缺點則是隻適合短途運輸，因為(wei) 即便運輸時培養(yang) 基中不添加血清，細胞還是會(hui) 不斷增殖，當細胞長滿後，細胞的狀態會(hui) 隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從(cong) 國外大型細胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好，在良好的操作下複蘇成活率很高;如果是從(cong) 國內(nei) 細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態，並且降低運輸成本。

GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結轉移癌細胞)分別針對兩(liang) 種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對於(yu) 直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到後是否有足量剩餘(yu) 幹冰，如果幹冰不足，或是已經沒有幹冰，則細胞狀態可能會(hui) 收到影響，建議盡快複蘇;如果有足量幹冰，建議先轉移至-80℃冰箱過夜，於(yu) 第二天按正常流程複蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心後去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養(yang) 基，輕柔吹勻後轉移至培養(yang) 皿中，補足培養(yang) 基;一般貼壁細胞在24h內(nei) 即可觀察到細胞貼壁，從(cong) 而判斷細胞狀態，懸浮細胞則複蘇後即可觀察細胞狀態。對於(yu) 凍存時間較長的細胞，可能需要傳(chuan) 代1到2次後，細胞才會(hui) 調整到正常狀態，所以細胞複蘇後如果狀態不佳，不要灰心，仍要細心培養(yang) 。

對於(yu) 複蘇後寄送活細胞的情況，則細胞收到後要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體(ti) 受損。如果發現細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然後置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中靜置1-2h。待細胞穩定後，觀察細胞狀態，並及時記錄，因為(wei) 很多國內(nei) 細胞庫都是可以反饋細胞狀態的，如果收到時細胞狀態不佳甚至汙染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳(chuan) 代並更換適合細胞的新鮮培養(yang) 基。由於(yu) 新細胞一般都是第一次接觸，細胞傳(chuan) 代過程中尤為(wei) 需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會(hui) 影響細胞狀態，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yang) 箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。