貨源介紹

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　　質粒載體網是質粒構建及應用研究的專業平台,提供質粒構建和應用技術的最新進展和實用方法,為科研人員提供質粒相關研究的最新動態和資源支持。

　　一、CA46細胞源於Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Magrath建立的係列淋巴瘤細胞係之一。CA46細胞EBV核抗原(EBNA)陰性，表達表麵IgM和分泌不能與A蛋白結合的IgM，12％的群體細胞表達補體受體，但不表達Fc受體。CA46細胞生長的群體倍增時間是16小時，具較快的生長速度。

　　種屬:人

　　組織來源:腹水液

　　生長特性:懸浮

　　細胞形態:淋巴母細胞樣

　　生長培養基:RPMI-1640＋20%FBS＋1%P/S

　　培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　二、Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞)的功能

　　（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發血管病變的重要因素。

　　（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎症反應。

　　（3）與血管疾病的進展和穩定有關。

　　生理變化：

　　（1）主動脈硬化。

　　（2）主動脈瘤

　　（3）主動脈鈣化。

　　基本特性：

　　（1）組織來源於正常大鼠大動脈組織。

　　（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。

　　（3）原代細胞培養末期液氮凍存。

　　（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。

　　（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。

　　（6）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

　　三、Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞)的運輸和保存

　　視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商後選擇下述方式中的一種進行。

　　1)1mL凍存細胞懸液裝於1.8ml的凍存管中，置於裝滿幹冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞後請盡快解凍複蘇細胞進行培養，如無法立刻進行複蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

　　2)T-25培養瓶充滿完全培養基後進行常溫運輸；收到細胞後請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至於培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

　　操作流程：

　　1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

　　1.2 hek-293細胞的複蘇培養傳代及凍存：

　　1.2.1細胞的複蘇培養從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,並不斷的搖動,使之迅速融化。將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒後打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然後1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液,以1×105/ml密度接種於25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。

　　1.2.2細胞傳代原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然後加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。

　　1.3細胞形態的觀察在倒置顯微鏡下觀察並記錄細胞的生長情況及形態特征。

　　1.4細胞的計數常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁並浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸並吹打製成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4)×104。

　　1.5細胞的貼壁率指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數後分別接種於12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數)×100％，計算貼壁率。

　　1.6生長曲線取指數生長期的細胞用胰酶消化製成單細胞懸液，以1×104/孔接種於24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目並計算平均值。連續計數10d，繪製細胞生長曲線。

　　四、注意事項

　　(1)嚴格無菌操作；

　　(2)本產品隻供科研使用，不可應用於臨床。