貨源介紹

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　　產品類別：人源細胞係

　　生長特性：懸浮細胞

　　培養體係：1640+10%FBS

　　傳代方法：第一次建議1:2傳代

　　細胞形態：圓形

　　凍存條件：無血清細胞凍存液

　　一、細胞培養條件

　　英文名稱Hmc-1中文名稱人肥大細胞

　　生長特性圓形、懸浮凍存條件無血清凍存液

　　培養體係1640+10%FBS

　　傳代方法1:2-1:3,第一次建議1:2傳代傳代情況2~3天換液/傳代

　　備注用無菌離心管收集瓶子培養基，留作過渡培養

　　二、細胞收到後處理

　　收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養箱靜置若幹小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為我方進行售後的依據。

　　細胞在培養瓶中培養至良好狀態後灌滿完全培養液並封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室後，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒後放到超淨台內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰鬆）

　　三、細胞培養步驟

　　1）複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鍾，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液並檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　1、對於懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

　　方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鍾，棄上清液，補加1-2ml培養液後吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

　　方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基後，將剩餘細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

　　PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞後，用75%酒精噴灑整個管子消毒後放到超淨台或安全櫃內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右完全培養基混勻，放入培養箱過夜培養後查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

　　3）細胞凍存：

　　1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%麵積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

　　2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然後將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

　　3、用適量的凍存液重懸細胞，並放置於凍存管中；

　　4、先將細胞凍存管放置於-20℃1.5h，然後將其移入-80℃。